Analisis> Studi mikroskopis (bakterioscopic) dari apusan pulasan Gram dalam diagnosis proses infeksi dan inflamasi

Informasi ini diposting di situs hanya sebagai referensi. Pastikan untuk berkonsultasi dengan seorang spesialis.
Jika Anda menemukan kesalahan dalam teks, umpan balik yang salah atau informasi yang salah dalam deskripsi, maka beri tahu administrator situs tentang hal ini.

Ulasan yang diposting di situs ini adalah pendapat pribadi dari orang yang menulisnya. Jangan mengobati diri sendiri!

Usap pada flora wanita: apa yang menentukan, tingkat dan patologi

Usap pada flora - sering ditunjuk oleh analisis ginekolog. Apa yang dia tunjukkan dan kesalahpahaman apa yang ada di akunnya?

Analisis ini dapat disebut "umum". Ini adalah diagnosis utama, yang memungkinkan dokter untuk mengkonfirmasi atau menolak kehadiran proses peradangan di vagina, uretra, saluran leher rahim, dan juga untuk menarik kesimpulan tertentu tentang kemungkinan menopause atau perubahan klimakterik pada pasien.

• microscopic (bacterioscopic) Gram-stained smear adalah nama resmi;
• apusan dari alat kelamin;
• bakterioskopi;
• mikroskopi.

Digunakan untuk mendiagnosa proses infeksi dan inflamasi. Bakterioskopi memungkinkan Anda untuk mendeteksi bakteri di kelamin perempuan: mikroorganisme paling sederhana - gonokokus, memprovokasi kencing nanah, trichomonas - agen penyebab trikomoniasis. Juga, seorang spesialis di mikroskop akan melihat beberapa bakteri, jamur (Candida), sel kunci (tanda vaginosis bakteri). Jenis mikroorganisme ditentukan oleh bentuk, ukuran, dan juga apakah itu diwarnai dengan pewarna atau tidak, yaitu, gram positif atau gram negatif.

Selain itu, di smear dari setiap titik (diambil dari vagina, uretra, saluran serviks) jumlah leukosit di bidang pandang dihitung. Semakin banyak dari mereka - semakin jelas proses inflamasi. Perkiraan jumlah epitelium dan lendir. Epitel datar terutama melimpah pada wanita usia reproduksi selama periode ovulasi - di tengah siklus menstruasi.

• kandidiasis vagina (sariawan);
• vaginosis bakteri (sebelumnya disebut gardnerellosis);
• gonore;
• trikomoniasis.

Jika tidak ada tanda yang jelas dari salah satu penyakit ini, tetapi apusan itu buruk, studi mendalam tentang bahan dilakukan - air balik dilakukan.

Alasan melakukan pembibitan di bidang ginekologi

1. Jika ada banyak leukosit dalam jumlah sedang atau besar, tetapi agen penyebab infeksi tidak diketahui. Karena mikroskopi, ada batas deteksi mikro yang lebih rendah: 10 hingga 4 - 10 hingga 5 derajat.
2. Jika mikroba terdeteksi, untuk menentukan kepekaan terhadap antibiotik.
3. Jika ada tanda-tanda infeksi jamur. Untuk secara akurat menentukan jenis jamur dan meresepkan obat antimycotic yang efektif.

Jamur jenis lain Candida tidak dapat diobati jika tidak ada gejala patologis.

Jika sel-sel kunci ditemukan (tanda-tanda vaginosis bakteri), tetapi mikroba lain juga hadir. Untuk identifikasi.

Apa perbedaan antara backwater, smear on flora dan tingkat kemurnian vagina?

Dalam metode penelitian. Dengan noda umum, bahan yang diendapkan pada sepotong kaca diwarnai dengan pewarna khusus dan dilihat di bawah mikroskop. Dan ketika penelitian bakteriologis (bacpericulture, budaya, mikrobiologi) dilakukan, pertama kali “ditanam” pada medium nutrisi. Dan kemudian, setelah beberapa hari, mereka melihat di bawah mikroskop - koloni mikroorganisme telah tumbuh.

Artinya, jika kita berbicara tentang analisis ekspres, Anda akan diberi pendapat hanya tentang jumlah leukosit, epitel dan lendir. Menabur tidak mendesak

Juga dengan mikroskopi, Anda dapat dengan cepat menentukan tingkat kemurnian dari vagina. Di sini, dokter hanya menilai hubungan antara mikroflora normal, kondogenik patogenik dan patogen.

Penilaian klasik tentang kemurnian vagina.

Apa yang dokter tidak lihat dengan mikroskopi

1. Kehamilan Untuk menentukannya, apusan tidak diperlukan dan tidak peduli apa hasil yang akan ditunjukkan. Anda harus lulus tes darah untuk hCG, menjalani pemeriksaan ginekologis oleh dokter atau ultrasound uterus. Anda dapat mengidentifikasi chorionic gonadotropin dalam urin, tetapi tidak dalam cairan dari alat kelamin!
2. Kanker rahim dan leher rahim. Untuk mendiagnosis degenerasi maligna endometrium, diperlukan material histologis, dan dalam jumlah besar. Dan bawa langsung dari uterus dengan kuretase diagnostik terpisah.

Kanker serviks dan patologi lainnya (erosi, leukoplakia, koilocytosis, kerusakan HPV, sel atipikal, dll.) Didasarkan pada hasil studi sitologi. Analisis ini diambil langsung dari serviks, dari zona transformasi, sesuai dengan metode spesifik dengan pewarnaan Papanicolaou (maka nama analisis - tes PAP). Ini juga disebut oncocytology.

Empat infeksi pertama didiagnosis oleh PCR. Dan untuk menentukan keberadaan virus immunodeficiency dengan mengoles dengan akurasi tinggi tidak mungkin. Anda harus lulus tes darah.

Bagaimana mempersiapkan analisis dan kapan diperlukan

Seorang dokter mengambil apusan dari seorang pasien di kursi ginekologi (terlepas apakah dia hamil atau tidak) menggunakan sikat khusus atau sendok steril Volkmann. Tidak sakit sama sekali dan sangat cepat.

Secara teknis mungkin untuk mencapai hasil yang baik, bahkan sempurna jika Anda membersihkan vagina Anda dengan klorheksidin atau miramistin, misalnya. Tapi apa masalahnya?

• douche;
• berhubungan seks;
• menggunakan produk kebersihan vagina, deodoran intim, dan obat-obatan jika mereka tidak diresepkan oleh dokter;
• lakukan ultrasound menggunakan probe vagina;
• menjalani kolposkopi.
• sebelum mengunjungi dokter kandungan atau laboratorium, selama 3 jam, Anda tidak boleh buang air kecil.

Menyuntikkan stroke perlu perdarahan menstruasi. Bahkan jika hanya ada “memulaskan” pada hari terakhir menstruasi, lebih baik menunda penelitian, karena hasilnya mungkin buruk - sejumlah besar sel darah putih akan terungkap.

Mengenai asupan alkohol tidak dilarang.

Dapatkah saya meminum smear sambil meminum antibiotik atau segera setelah perawatan? Hal ini tidak diinginkan untuk melakukan ini dalam 10 hari setelah menggunakan tindakan lokal obat (vaginal) dan satu bulan setelah mengambil agen antibakteri secara lisan.

Pemeriksaan mikroskopis diresepkan:

• secara rutin ketika mengunjungi seorang ginekolog;
• saat masuk ke rumah sakit ginekologi;
• sebelum IVF;
• selama kehamilan (terutama jika apusan sering buruk);
• jika ada keluhan: buang yang tidak biasa, gatal, nyeri panggul, dll.

Interpretasi hasil: apa yang harus dipertimbangkan norma, dan apa - patologi dalam mikroflora

Untuk memulainya, kami membawa ke perhatian Anda tabel di mana indikator yang disebut tingkat kemurnian pertama ditampilkan. Tidak ada penyebutan uretra di dalamnya (meskipun bahannya juga diambil dari sana), karena kita berbicara tentang penyakit-penyakit ginekologis. Proses peradangan di uretra dirawat oleh seorang ahli urologi.

Epitel - jumlah sel epitel tidak dihitung, karena tidak memiliki nilai diagnostik. Tetapi terlalu sedikit dari epitelium berbicara tentang jenis atrofi dari smear - itu terjadi pada wanita selama menopause.

Leukosit - dianggap dalam "bidang pandang":

• tidak lebih dari 10 - jumlah kecil;
• 10-15 - jumlah sedang;
• 30-50 - sejumlah besar, wanita tersebut memperhatikan gejala patologis, dan dokter selama pemeriksaan mendiagnosis proses peradangan di vagina dan (atau) pada leher rahim.

Lendir (helai lendir) - biasanya harus ada, tetapi sejumlah besar terjadi dengan peradangan. Dalam lendir uretra seharusnya tidak.

Bakteri flora atau gr laktomorphotypes - norma, itu adalah perlindungan vagina dari kuman.

Trichomonas, gonococci dan sel kunci pada wanita yang sehat di serviks dan vagina tidak seharusnya. Candida juga tidak ada. Setidaknya dalam jumlah yang signifikan, yang terdeteksi dalam analisis flora.

Kecocokan smear tidak besar. Tetapi jika seorang wanita memasuki rumah sakit, maka mereka mengambil segar dari kanan di sana, selama pemeriksaan awal di kursi.

Biasanya hasilnya berlaku 7-14 hari. Karena itu, jika Anda harus lulus sebelum operasi, lakukanlah 3 hari sebelum masuk ke rumah sakit. Yang terakhir dari tes yang ditugaskan.

Apa yang ditemukan di bacposseve

Ginekolog akan dapat menguraikan hasil penelitian budaya terbaik dari semuanya. Tetapi Anda sendiri, jika Anda membaca informasi di bawah ini, tentatif mencari tahu analisis Anda.

Jumlah mikroorganisme dapat dinyatakan dengan "salib":

• "+" Adalah jumlah yang kecil;
• “++” adalah jumlah sedang;
• "+++" adalah angka yang besar;
• "++++" - flora berlimpah.

Tetapi lebih sering jumlah perwakilan mikroflora dinyatakan dalam derajat. Misalnya: Klebsiella: 10 hingga 4 derajat. By the way, ini adalah salah satu wakil enterobacteria. Gram negatif tongkat, mikroorganisme aerobik. Salah satu patogen paling berbahaya, meskipun itu hanya oportunistik. Ini karena Klebsiella tahan (kebal) terhadap sebagian besar agen antibakteri.

Di bawah ini kami menjelaskan istilah umum lainnya yang ditemukan dalam hasil penelitian, atau Anda dapat mendengar dari dokter.

Soor - adalah candida atau dengan cara lain - sariawan. Ini diperlakukan dengan obat antimikotik (antijamur).

Feast seperti jamur blastospores dan pseudomycelium - kandidiasis atau penyakit jamur lain, biasanya diperlakukan sama dengan sariawan.

Difteroids - mikroorganisme patogen kondisional, menurut hasil penelitian oleh para ilmuwan, pada kebanyakan wanita sekitar 10% dari mikroflora adalah mereka, serta streptokokus, staphylococci, E. coli, gardnerella. Jika flora terganggu, jumlah mereka meningkat.

Leptotrix adalah bakteri gram negatif anaerob yang menyebabkan leptotrichosis. Baca lebih lanjut tentang ini di artikel ini.

Flora campuran adalah varian dari norma, jika tidak ada gejala penyakit, benar-benar leukosit atau peningkatan yang kuat (40-60-100). 15-20 adalah varian dari norma, terutama selama kehamilan.

Enterococci (Enterococcus) adalah perwakilan dari mikroflora usus, yang kadang masuk ke vagina. Gram cocci positif. Tentang enterococcus fecalis (Enterococcus faecalis) yang kami tulis sebelumnya. Ada juga enterococcus coli - E. coli. Biasanya menyebabkan gejala yang tidak menyenangkan pada konsentrasi di atas 10 dalam 4 derajat.

Pseudomonas aeruginosa adalah bakteri gram negatif. Sering mempengaruhi orang dengan kekebalan rendah. Ini memiliki ketahanan yang baik terhadap antibiotik, yang mempersulit proses pengobatan.

Polymorphic bacillus adalah perwakilan umum dari biocenosis vagina. Jika jumlah leukosit normal dan tidak ada keluhan, kehadirannya tidak boleh mengganggu.

Eritrosit - bisa dalam jumlah kecil dalam apusan, terutama jika diambil selama proses inflamasi atau ketika ada bercak kecil.

Coccus atau flora coccobacterial - biasanya selama proses infeksi di vagina atau di serviks. Jika seorang wanita memiliki keluhan, pengobatan antibakteri diperlukan - debridemen vagina.

Diplococci adalah sejenis bakteri (cocci). Dalam jumlah kecil tidak membahayakan. Dengan pengecualian gonokokkov - patogen gonore. Dia selalu dirawat.

Dan sebagai kesimpulan kami akan mengutip singkatan yang sering ditulis pada bagian kosong dari hasil analisis:

• L - leukosit;
• Ep - epitel;
• Pl. ep. - epitel skuamosa;
• Gn (gn) –monococcus, agen penyebab gonore;
• Trich - trichomonas, agen penyebab trikomoniasis.

Dengan gram smear

Biologi dan Kedokteran

Tergantung pada struktur dinding sel, prokariot yang termasuk ke dalam eubacteria terbagi menjadi dua kelompok besar. Ditemukan bahwa jika sel-sel eubacteria tetap dirawat pertama dengan kristal violet dan kemudian yodium, kompleks berwarna dibentuk. Dengan pengobatan selanjutnya dengan alkohol, tergantung pada struktur dinding sel, nasib kompleks berbeda: dalam apa yang disebut spesies gram positif, kompleks ini dipertahankan oleh sel, dan yang terakhir tetap berwarna, dalam spesies gram negatif, sebaliknya, kompleks dicat dicuci keluar dari sel, dan mereka menjadi berubah warna. (Metode ini pertama kali diusulkan pada tahun 1884 oleh ilmuwan Denmark H. Gram (Ch. Gram), yang terlibat dalam pencelupan jaringan. Kemudian digunakan untuk bakteri).

Dalam beberapa eubacteria, reaksi positif ketika diwarnai dengan cara yang dijelaskan di atas hanya karakteristik sel yang berada di tahap pertumbuhan aktif. Ditemukan bahwa kompleks dicat terbentuk pada protoplas, tetapi retensi oleh sel atau pencucian dari itu selama pemrosesan selanjutnya dengan alkohol ditentukan oleh fitur struktural dinding sel.

Pewarnaan obat meningkatkan sensitivitas mikroskopi, karena bakteri yang tidak tercemar tidak dapat dibedakan dengan baik bahkan dengan peningkatan 400-1.000.

Pewarnaan Gram diferensial adalah yang paling umum, meskipun pewarnaan monokrom juga digunakan. Gram stain memungkinkan untuk membedakan bakteri yang dinding sel tebal hampir seluruhnya terdiri dari peptidoglikan (gram-positif) dari bakteri yang dinding selnya, di samping lapisan tipis peptidoglikan, memiliki membran luar yang terdiri dari lipoprotein dan lipopolisakarida (gram-negatif). Pewarna utama (misalnya, kristal violet) dengan kuat tertempel di dinding bakteri gram positif, memberi mereka warna hitam kebiruan, dan mudah dicuci dengan alkohol (atau aseton) dari dinding bakteri gram negatif, setelah itu dicelup dengan pewarna yang kontras (misalnya safranin) dalam warna merah.

Pewarnaan Gram sangat diperlukan dalam penelitian apusan sputum. Jika dahak diterima dengan benar, setidaknya 25 neutrofil dan kurang dari 10 sel epitel terlihat di bidang pandang pada pembesaran rendah. Sejumlah besar sel epitel dan berbagai jenis bakteri menunjukkan bahwa sputum terkontaminasi dengan isi orofaring. Meskipun seringkali sulit untuk membedakan mikroflora normal dari bakteri patogen, noda noda Gram memberikan informasi yang berharga jika bakteri patogen memiliki indikasi yang tersedia untuknya (sinyal biologis). Sebagai contoh, pada vaginosis bakterial, sel-sel epitel yang ditandai dengan bakteri gram positif terlihat dalam apusan vagina.

Mikroskop feces smear gram-bernoda, digunakan sebagai studi skrining. Ketika neutrofil terdeteksi, mereka memulai penelitian bakteriologis dan penentuan racun yang dihasilkan oleh Clostridium difficile.

Pewarnaan Gram juga digunakan untuk mengidentifikasi bakteri dan sel darah putih dalam cairan CSF, sinovial, pleura, dan peritoneum. Batas bawah sensitivitas dari metode ini adalah 10.000 bakteri per 1 ml.

Untuk meningkatkan sensitivitas, cairan tes disentrifugasi dan smear apus berwarna disiapkan. Prosedur ini disebut bahan pengayaan. Ini sederhana dan sangat berharga untuk mendeteksi bakteri dan sel darah putih di CSF dan bakteri tahan asam dalam dahak.

Referensi:

Metode bakteriologi umum

Teknik pengecatan smear. Untuk celupan celupan, gunakan solusi cat atau kertas tinta, seperti yang disarankan oleh A.I. Biru Kemudahan persiapan, kemudahan penggunaan, serta kemampuan untuk menyimpan kertas tinta untuk waktu yang tidak terbatas, adalah dasar untuk digunakan secara luas dalam berbagai metode pewarnaan.

Mewarnai goresan kertas lukisan. Beberapa tetes air diberikan pada preparasi yang kering dan tetap, kertas berwarna sebesar 2–2 cm. Selama periode pencelupan, kertas harus tetap basah dan melekat erat pada permukaan kaca. Saat mengeringkan, kertas juga dibasahi dengan air. Durasi pewarnaan noda ditentukan oleh metode pewarnaan. Pada akhir pencelupan, kertas dihapus secara hati-hati dengan tang, dan apusan dicuci dengan air keran dan dikeringkan di udara atau kertas saring.

Pewarnaan noda dengan larutan pewarna. Dye diterapkan pada preparasi kering dan tetap dengan pipet dalam jumlah seperti itu yang mencakup seluruh smear. Ketika noda diwarnai dengan larutan pewarna yang terkonsentrasi (fuchsin karbolik Zielya, gentian karbolik atau kristal violet), mereka diwarnai melalui kertas saring yang mempertahankan partikel pewarna: selembar kertas saring diletakkan pada noda tetap dan larutan pewarna dituangkan ke atasnya.

Untuk pemeriksaan mikroskopik, apusan yang sudah disiapkan, dikeringkan dan diperbaiki, dikenakan pewarnaan. Mewarnai itu sederhana dan rumit. Pewarnaan sederhana terdiri dalam menerapkan cat tunggal pada stroke untuk jangka waktu tertentu. Paling sering, cat air sederhana digunakan air-alkohol (1:10) Pfeiffer fuchsin, Leffler methylene blue dan safranin. Eosin, sebagai pewarna asam, hanya digunakan untuk mewarnai sitoplasma sel dan mewarnai latar belakang. Magenta asam benar-benar tidak cocok untuk pewarnaan bakteri.

Dengan pewarnaan sederhana, tubuh mikroba merasakan warna pewarna yang digunakan selayak inti sel; pada saat yang sama, sitoplasma dan seluruh latar belakang dari smear (jika bukan smear dari budaya murni) dicat dengan warna yang sama, tetapi agak lebih pucat. Fuchsin dan gentian violet adalah cat yang lebih intens; noda biru metilen lebih pucat. Persepsi warna tidak hanya tergantung pada sifat-sifat cat, tetapi juga pada sifat-sifat mikroba yang akan diwarnai. Sebagian besar mikroba mudah dan cepat diwarnai dengan larutan air atau alkohol-cat.

Untuk mikroba penghalus keras (misalnya, agen penyebab tuberkulosis) atau bagian-bagiannya (spora, flagella, dll.), Metode pewarnaan yang lebih intensif (paksa) harus diterapkan.

Hal ini dimungkinkan untuk memaksa pewarnaan: a) dengan meningkatkan kemampuan pewarnaan cat dasar, b) dengan memperpanjang waktu pewarnaan dan c) dengan tindakan acar.

Untuk meningkatkan daya pewarnaan, cat terkena suhu tinggi (pemanasan) hingga muncul uap (bahkan mendidih). Dengan memvariasikan tingkat pemanasan, adalah mungkin untuk mendapatkan derajat kekuatan warna yang berbeda.

Pemanjangan efek larutan pewarna pada suatu objek juga dapat meningkatkan derajat pewarnaan.

Mordan adalah zat yang memfasilitasi penetrasi pewarna ke dalam sel: fenol, tanin, asam asetat dan asam kromat, alkali, dll. Mekanisme tindakan mordan berbeda: dalam beberapa kasus, mordan bertindak pada pewarna, di lain, pada kemampuan sel untuk persepsi warna. The mordan bertindak pada smear baik sebelum tindakan cat (misalnya, saat mewarnai flagella), atau bersama-sama dengan cat (fenol dalam Tsili fuchsin), atau setelah aksi cat (Lyugolevsky solusi dalam metode Gram).

Ketika mengecat apusan, selain cat, apa yang disebut zat pemutihan atau pewarna juga digunakan. Yang terakhir berfungsi untuk menghilangkan kelebihan cat dari seluruh sel mikroba atau dari bagian itu ketika cat terlalu kuat dalam menyerap bahan atau ketika mengecat ulang menggunakan panas, dll.

Berikut ini digunakan sebagai agen pemutih: alkohol, larutan encer asam sulfat 5%, larutan asam nitrat berair 20-30%, larutan asam hidroklorat 3% dalam alkohol absolut, dll.

Untuk melukis smear, perlu memiliki desktop solusi warna dalam botol (lebih baik dari kaca oranye) dengan pipet dan kaleng karet. Botol harus diberi label dengan sebutan yang sesuai; Untuk menghindari kontaminasi cepat dengan label cat, disarankan untuk merendamnya dengan parafin cair (menggunakan sikat). Botol cat ditempatkan di tripod kayu - blok (Gbr. 2).

Fig. 2. Botol untuk cat

Untuk mencuci cat dan bilasan, botol dengan tabung di dudukan untuk air suling dan cetakan (cangkir saluran) dengan jembatan berdiri untuk apusan diperlukan. Berdiri jembatan terdiri dari dua tabung gelas atau tongkat yang terhubung di ujungnya dengan potongan tabung karet. Lebar dudukan harus kurang dari panjang slide. Selain itu, pembakar alkohol (atau gas) dan pinset Cornet untuk slide mikroskop diperlukan untuk mengoles. Ketika melukis dengan pemanasan, kaca geser dicengkeram dengan pinset dan ditahan selama waktu tertentu di atas api. Dalam hal pewarnaan yang berkepanjangan, mereka menggunakan cuvettes atau cangkir kecil, di mana mereka menuangkan cat dan membenamkannya di dalamnya. Saat melukis beberapa noda dalam cuvette pada saat yang sama, untuk mencegah gelas saling menempel, mereka bergabung dengan dua dengan sisi yang dilumuri dan diperkuat dengan cincin karet yang dipotong dari tabung. Setelah pewarnaan, penyeka dicuci dengan air dan dikeringkan secara menyeluruh dengan kertas saring.

Pekerjaan beberapa tahun terakhir telah mengungkapkan kemungkinan melestarikan kelangsungan hidup mikroba, terutama spora-bearing, selama pewarnaan. Oleh karena itu, fiksasi yang cukup dari stroke diperlukan. Air cuci (jika bernoda) harus dikeringkan ke dalam bejana khusus, diikuti dengan netralisasi, kertas saring bekas (setelah mengeringkan noda) tidak boleh dibuang, tetapi dibakar, dan noda yang digunakan harus didesinfeksi.

Metode-metode sederhana untuk pengecatan noda

Dengan metode pengecatan sederhana, beberapa tetes air alkohol atau larutan cat berair dituangkan ke dalam apusan tetap selama 1-2 menit; Fuchsin (1:10) atau Leffler methylene blue paling sering digunakan untuk tujuan ini. Kemudian cat dibersihkan dengan air suling dan apusan dikeringkan di antara dua lembar kertas saring. Biasanya fuchsin (1:10) berwarna 10-30 detik, dan biru metilen - 2-10 menit. Noda-noda Fuchsin mengoles lebih intensif, dan ketika diwarnai dengan metilen biru, lembut, lebih banyak persiapan yang lebih elegan. Apusan setelah pengeringan dengan kertas saring harus benar-benar kering, sebaliknya jika sisa kelembaban bersentuhan dengan minyak cedar, emulsi akan terbentuk dan mikroskopi akan menghasilkan gambar yang tidak jelas. Secara umum, durasi pewarnaan tergantung pada jenis dan kualitas larutan pewarnaan, tingkat kerentanan mikroba terhadap pewarnaan dan ketebalan noda.

Mewarnai oleh Muromtsev

Persiapkan dua solusi:

Carbolic acid (kristal)

Setelah cat dilarutkan, kedua larutan dicampur dan disaring melalui saringan kertas. Cat bertahan untuk waktu yang lama. Smear dicat melalui kertas saring strip selama 15 hingga 30 detik.

Memperbaiki noda, penulis merekomendasikan untuk memproduksi campuran alkohol (80 bagian) dengan formalin (20 bagian) selama 3-10 menit.

Dengan noda smear ini di sel mikroba, inklusi, bipolaritas, kapsul dan spora terdeteksi. Metode ini cocok untuk pewarnaan noda dari organ, darah, kultur pada media dengan protein asli dan pada agar semi-cair.

Latar belakang obat dari substrat ini berwarna merah muda; sel-sel jaringan dan tubuh mikroba dicat dengan warna biru kebiruan.

Metode pewarnaan yang sulit (diferensial)

Metode pewarnaan yang rumit didasarkan pada karakteristik struktur fisiko-kimia sel mikroba. Inti dari metode ini terletak pada dampak pada noda dua pewarna, salah satunya adalah cat utama (utama), dan yang lainnya - tambahan (kontras). Setelah terpapar pada cat pertama, noda tersebut berubah warna dan hanya setelah itu akan dikenakan pewarna tambahan. Sejumlah reagen kimia (asam, alkali, alkohol, aseton, dll.) Dapat digunakan sebagai bahan pemutih. Mencuci apusan dengan air biasa juga merupakan proses pemutihan yang murni mekanis, tetapi ini membutuhkan waktu yang lama; selain itu, perubahan warna tidak lengkap. Sehubungan dengan zat pemutihan, mikroba dapat dibagi menjadi kelompok-kelompok dengan mudah dan sulit untuk memutih. Tidak semua jenis mikroba sama relevan dengan zat pemutih; beberapa asam dan tahan alkohol, yang lain hanya tahan asam. Akhirnya, beberapa, misalnya, spora, dengan gigih menahan efek dari semua zat pemutih dan termasuk kelompok yang tahan terhadap cat.

Metode pewarnaan kompleks memiliki nilai diagnostik diferensial yang penting untuk mengkarakterisasi mikroba yang diteliti.

Gram stain

Ketika memproses noda (bagian) dari organ dan jaringan yang mengandung mikroorganisme, gentian violet, dan kemudian yodium, persiapan, dicat hitam, memiliki sifat pemutihan di bawah aksi alkohol. Pada saat yang sama, beberapa bakteri yang terkandung dalam noda juga berubah warna, sementara yang lain berubah menjadi ungu. Dengan pewarnaan tambahan (khususnya, dengan Pfeiffer's Fuchsin), bakteri dihilangkan warna dengan alkohol berwarna merah (gram-negatif). Lainnya yang dengan tegas mempertahankan warna ungu (senyawa yodium + gentian violet), yang tidak diputihkan dengan alkohol, termasuk kelompok bakteri gram positif. Perbedaan antara bakteri gram positif dan bakteri gram negatif tergantung pada perbedaan titik isoelektrik mereka, dan kemampuan bakteri gram positif untuk mempertahankan warna dikaitkan dengan keberadaan garam magnesium dari asam ribonukleat, yang tidak mengandung bakteri gram negatif. Yang terbaik dari semuanya, pewarnaan Gram diperoleh setelah noda difiksasi dengan metode fisik (pemanasan). Karakteristik sikap jenis bakteri tertentu untuk cat yang berbeda, khususnya, untuk mewarnai dengan metode Gram, dicirikan oleh sifat tingtur yang disebut mikroba.

Teknik mewarnai. Saring kertas saring dengan ukuran yang sedikit lebih pendek dan slide ditempatkan pada noda yang melekat dengan panas, dan jumlah yang cukup dari kristalviolet, karbol atau larutan gentian violet anil, atau beberapa cat triphenylmethane violet lainnya (misalnya, metilviolet) selama 1-2 menit dituangkan ke atasnya. Kemudian cat dikeringkan, selembar kertas saring dilepas dan, tanpa dicuci dengan air, larutan Lugol dituangkan ke dalam apusan selama 1-2 menit. Solusinya dikeringkan dan dekolorisasi obat dalam 96 ° alkohol selama 30-60 detik, dicuci dengan air dan diwarnai dengan Fuchsin Pfeiffer (atau diencerkan dengan safranin, netral atau vesuvine) selama 2–3 menit. Kemudian cat dicuci bersih dengan air, dan apusan dikeringkan dengan kertas saring bersih.

Gambar mikroskopis: jika pewarna Gram diwarnai dengan benar, mikroba gram positif akan berwarna ungu gelap dan warna gram negatif akan diwarnai sebagai cat tambahan (misalnya, warna merah muda Pfeiffer dari fuchsin fuchsin).

Jangan gunakan kertas filter yang terkontaminasi: transfer mikroba secara mekanis dari satu smear ke smear lain dimungkinkan, yang dapat mempengaruhi hasil mikroskopi. Durasi paparan cat, larutan Lugol (mordan) dan alkohol tergantung pada ketebalan apusan. Khususnya titik krusial dalam pewarnaan gram adalah perubahan warna apusan dengan alkohol. Dengan paparan singkat terhadap alkohol, persiapan yang diwarnai diperoleh, dan dengan pemaparan yang berkepanjangan, semua mikroba (termasuk p-positif) akan menghitamkan. Pada apusan tebal dan tebal (misalnya, dari kultur agar), waktu terpapar alkohol harus lebih lama daripada noda tipis, terutama dari kultur cair. Ketika terpapar alkohol pada noda yang tidak merata di bagian-bagiannya yang tebal, mikroba tersebut tetap tidak berubah warna, dan dalam warna tipis mereka akan menghitamkan; Anda mendapatkan pola warna "beraneka warna", yang dapat mengarah pada kesimpulan yang salah.

Kadang-kadang bakteri gram negatif dapat diamati dalam kultur bakteri gram positif, yang lebih besar, semakin tua populasinya. Ini tidak lebih dari mayat bakteri yang telah mengalami autolisis intraseluler, sebagai akibat dari sel yang telah kehilangan magnesium ribonukleinat. Di sisi lain, dalam budaya yang sangat muda (beberapa jam pertumbuhan) dari keluarga enterobacteria, raksasa, bentuk-bentuk remaja dari bakteri ini, yang 2-3 kali lebih besar daripada orang dewasa (yang 18 jam), sangat basofilik karena sitoplasma mereka kelebihan beban dengan ribonukleinat. Oleh karena itu, ketika mewarnai dengan Gram, mereka diwarnai dengan magenta begitu kuat sehingga, dalam cahaya yang buruk, mereka dapat diambil sebagai bentuk vegetatif gram positif dari batang sporiferous.

Untuk pemula, serta dalam kasus-kasus yang meragukan, dianjurkan untuk menyiapkan persiapan kontrol pada gelas yang sama di mana tes smear berada - satu dari budaya mikroba, jelas gram positif, dan yang lainnya dari yang gram negatif.

Ketika perubahan warna obat dalam gram-alkohol berwarna dapat dituangkan langsung pada noda, terus gemetar kaca. Lebih baik untuk melakukan perubahan warna dalam cuvettes di mana alkohol dituangkan, dan, dengan mengambil pinset Cornet, obat tersebut diangkat dan diturunkan, mengamati warna alkohol yang mengalir turun dari gelas. Perubahan warna ini dianggap lengkap ketika tetes alkohol yang mengalir ke bawah dari noda menjadi sama berwarna dengan alkohol dalam kuvet; biasanya dibutuhkan 10-30 detik, tergantung pada ketebalan stroke.

Alkohol 96 ° dalam cuvettes harus diganti lebih sering (80 ° alkohol tidak membedakan dengan benar apusan). Minuman beralkohol biasanya dituangkan dari cuvettes ke pembakar alkohol.

Untuk pemula, diskolorisasi apusan dengan alkohol beryodium dapat direkomendasikan. Telah ditetapkan bahwa jika sedikit yodium tingtur ditambahkan ke cairan decolorizing, maka mikroba, yang bernoda gram-positif, tidak menghitamkan dalam cairan seperti itu bahkan selama satu jam, dan yang gram-negatif berwarna dalam waktu sekitar 5 detik. Menurut Savateev, itu cukup untuk menambahkan 2-4 ml 10% yodium tingtur per 100 ml alkohol 95 °; solusinya dapat bertahan untuk waktu yang lama. Jika aseton digunakan sebagai pengganti alkohol, yodium tingtur ditambahkan sebelum digunakan.

Dua menit sudah cukup untuk perubahan warna apusan dengan alkohol beryodium, diikuti dengan mencuci dengan air dan pewarna Pfeiffer-fuchsin tambahan.

Memodifikasi Metode Warna Gram

Seperti disebutkan di atas, pewarnaan Gram adalah metode yang paling penting untuk mengidentifikasi bakteri. Secara teoritis memungkinkan untuk membagi bakteri menjadi dua kelompok: gram positif dan gram negatif; dalam kenyataannya, ada kasus ketika bakteri yang sama dicirikan sebagai "gram-dipilih". Karena metode ini pertama kali dikembangkan oleh Christian Gram pada tahun 1884, banyak modifikasi warna Gram telah diterbitkan. Apusan bakteri untuk pewarnaan pada slide kaca diperoleh dengan metode langsung dari suatu kultur pada media cair atau padat, tetapi yang terbaik adalah menyiapkannya dari sampel yang telah difiksasi dengan formalin. Beberapa menit tambahan dihabiskan untuk menangguhkan bakteri dalam 5% (v / v) formalin, mengumpulkan dan mencuci mereka dengan sentrifugasi, melunasi karena ukuran sel dan bentuk terjaga dengan baik, sel-sel diwarnai secara merata, dan endapan acak tersebar dari media kultur cair tidak ada. Bagaimanapun, dianjurkan untuk mengeringkan apusan di udara dan memperbaikinya dengan pemanasan, seperti untuk pencelupan sederhana. Penting untuk menstandardisasi metode pewarnaan gram. Hasil serupa memberikan dua metode pewarnaan - dalam modifikasi Hooker dan modifikasi Burke.

Gram mewarnai dalam modifikasi Hooker.

Solusi A untuk persiapan reagen pewarna:

Kristal violet (dengan kandungan bahan kering 90%)

Etanol 95% (v / v)

Solusi B untuk persiapan reagen pewarna:

Larutan A dan B dicampur untuk memperoleh reagen pewarna kristal violet. Biarkan selama 24 jam dan sebelum menggunakan filter melalui kertas saring.

Yodium dan kalium iodida dihancurkan dalam mortar dan air ditambahkan perlahan dengan penggilingan terus menerus, sampai yodium dilarutkan. Simpan dalam labu gelap.

Pelarut untuk pemutihan:

Etanol 95% (v / v)

Safranin O [2,5% (b / v) 95% (v / v) etanol]

Bilas bakteri yang dikeringkan dengan udara kering yang dicelupkan dalam panas direndam selama 1 menit dalam larutan pewarnaan kristal ungu.

Apusan dicuci dalam jet air keran yang lemah dan bersudut selama 2 detik.

Usapan ditempatkan dalam yodium stabil selama 1 menit.

Dicuci dengan lemah, mengalir pada aliran sudut air keran selama 2 detik, setelah itu dikeringkan dengan kertas blotting.

Celupkan apusan selama 30 detik dalam etanol 95%, gemetar yang terakhir, setelah itu apusan dikeringkan dengan kertas blotting.

Benamkan apusan selama 10 detik dalam pewarna tambahan.

Apusan dicuci dalam jet air keran yang lemah dan bersudut sampai warna di salurannya hilang, setelah itu dikeringkan dengan kertas blotting.

Gram stain dalam modifikasi Burke.

Kristal violet (dengan kandungan bahan kering 90%)

Mordan disiapkan dengan cara yang sama seperti modifikasi Hooker.

Solvent for discoloration: (hati-hati, mudah terbakar!)

Safranin O (dengan kandungan bahan kering 85%)

Apusan, dikeringkan di udara dan diperbaiki dengan pemanasan, direndam dalam larutan A, 2-3 tetes larutan B ditambahkan dan diinkubasi selama 2 menit.

Cuci apusan dengan yodium, lalu tutup selama 2 menit dengan mordant segar.

Usap dicuci dalam aliran air yang lemah dan miring dari keran selama 2 detik. Permukaan sekitar apusan dikeringkan dengan kertas blotting, tetapi apusan itu sendiri terlindungi dari kekeringan.

Pelarut pengurasan warna diterapkan setetes demi setetes ke noda dengan slide kaca yang dimiringkan sampai warna menghilang dari pelarut yang mengalir dari kaca. Setelah itu, apusan dikeringkan di udara.

Metode Gram adalah ini. Apa itu Metode Gram?

Metode Gram adalah metode pewarnaan mikroorganisme untuk penelitian yang memungkinkan diferensiasi bakteri sesuai dengan sifat biokimia dinding sel mereka. Ini diusulkan pada tahun 1884 oleh dokter Denmark G. K. Gram.

Bakteri Gram diwarnai dengan pewarna aniline - gentian atau methyl violet, dll., Kemudian pewarna itu diperbaiki dengan larutan yodium. Selama pencucian berikutnya dari obat berwarna dengan alkohol, jenis-jenis bakteri yang berwarna kuat disebut bakteri gram positif (dilambangkan dengan Gram (+)), tidak seperti bakteri gram negatif (Gram (-)), yang berubah warna saat dicuci.

Gunakan dalam diagnostik

Gram stain sangat penting dalam sistematika bakteri, serta untuk diagnosis mikrobiologis penyakit infeksi.

Gram-positif cocci (kecuali wakil dari genus Neisseria) dan bentuk sporiferous dari bakteri, serta ragi, mereka dicat dengan warna hitam kebiruan (biru gelap).

Banyak bakteri samar gram negatif, mereka berubah menjadi merah, inti sel menjadi merah terang, dan sitoplasma berwarna merah jambu atau merah.

Teknik mewarnai

Pewarnaan Gram mengacu pada metode pewarnaan yang kompleks ketika suatu noda dipengaruhi oleh dua zat warna, salah satunya adalah yang utama dan yang lainnya adalah tambahan. Selain pewarna, bahan pemutih digunakan untuk metode pewarnaan yang rumit: alkohol, asam, dll.

Pewarnaan Gram sering menggunakan pewarna aniline dari gugus trifenilmetana: gentian, metil violet, atau kristal violet. Gram-positif Gram (+) mikroorganisme memberikan koneksi yang kuat dengan zat warna dan yodium ini. Pada saat yang sama, mereka tidak menghitamkan ketika terkena alkohol, sebagai akibatnya, dengan pewarnaan tambahan dengan Fuchsin Gram (+), mikroorganisme tidak mengubah warna ungu yang diadopsi sebelumnya.

Gram-negatif Gram (-) mikroorganisme membentuk senyawa dengan pewarna dasar dan yodium yang mudah dihancurkan oleh aksi alkohol. Akibatnya, mikroba menjadi berubah warna dan kemudian diwarnai dengan magenta, memperoleh warna merah.

Persiapan materi untuk melukis

Bahan uji tersebar di lapisan tipis di atas permukaan slide yang direduksi dengan baik. Apusan yang telah disiapkan dikeringkan di udara dan diperbaiki setelah pengeringan sempurna. Bagian histologi disiapkan dengan teknik rutin, memperbaiki potongan jaringan dalam formalin dan menuangkan dalam parafin.

Memperbaiki

Ketika memperbaiki, apusan tetap pada permukaan slide, dan oleh karena itu sel-sel mikroba tidak dibersihkan selama pewarnaan selanjutnya dari persiapan. Selain itu, sel mikroba mati menodai lebih baik daripada sel hidup.

Ada metode fisik fiksasi, yang didasarkan pada efek suhu tinggi pada sel mikroba, dan metode kimia yang melibatkan penggunaan bahan kimia yang menyebabkan koagulasi protein sitoplasma.

Metode fiksasi fisik

Sebuah slide kaca dengan persiapan diambil dengan pinset atau I dan II jari tangan kanan dengan tepi dengan sikat ke atas dan dengan gerakan halus mereka dilakukan 2-3 kali di atas bagian atas api burner. Seluruh proses fiksasi harus tidak lebih dari 2 detik.

Keandalan fiksasi diperiksa dengan metode berikut: permukaan bebas goresan dari slide diterapkan ke permukaan belakang tangan kiri. Jika apusan sudah diperbaiki dengan benar, gelas harus panas, tetapi tidak menyebabkan sensasi terbakar (70-80 ° C).

Metode fiksasi kimia

Metil alkohol, aseton, campuran Nikiforov (campuran etil alkohol 96% dan anestetik eter dalam rasio 1: 1), Karnua cair (etil alkohol 96% - 60%, kloroform 30%, asam asetat glasial 10%), alkohol -formal (40% formalin 5 ml, etil alkohol 96 ° - 95 ml). Slide kaca dengan apusan kering direndam dalam labu dengan zat fiksatif selama 10–15 menit dan kemudian dikeringkan di udara. Fiksasi dalam pasangan formalin 40% selama beberapa detik juga digunakan.

Proses pewarnaan Smear

1. Pada noda tetap, tuangkan salah satu pewarna dasar selama 2-3 menit. Untuk menghindari pengendapan, itu ternoda melalui kertas saring.
2. Tiriskan catnya, angkat kertas saring dengan hati-hati. Sediaan apus dituangkan dengan larutan Lugol atau larutan iodida menurut Gram (larutan berair kalium iodida dan kristal iodin dalam rasio 2: 1) selama 1-2 menit sampai persiapan menghitam.
3. Larutan dikeringkan, suatu bilasan dibilas dengan 96 ° etil alkohol atau aseton, dituangkan dan dikeringkan sampai noda-noda dan cairan pengurasannya jernih (kira-kira 20-40-60 detik).
4. Cuci dengan hati-hati gelas dalam air yang mengalir atau suling selama 1-2 menit.
5. Untuk mengidentifikasi kelompok bakteri gram negatif, persiapan juga diwarnai dengan fuchsin atau safranin (2-5 menit).
6. Dicuci dalam air mengalir dan dikeringkan dengan kertas saring.

Teknik pewarnaan bakteri pada bagian histologis Gram-Weigert

1. Bagian dewaxed disesuaikan dengan air.
2. Noda 20 menit dalam larutan pararosaniline 1% atau fuchsin dasar dalam 1% asam asetat (larutan zat warna dipanaskan sampai mendidih, didinginkan dan disaring).
3. Dicuci dalam 3 shift air suling.
4. Cat 5 menit dalam 1% kristal violet dalam air suling.
5. Bilas dengan cepat dalam larutan natrium klorida 1%.
6. Diproses selama 30 detik dalam campuran: 1 bagian yodium + 2 bagian kalium iodida + 100 bagian air suling.
7. Blot dengan kertas saring.
8. Bedakan, berlaku untuk bagian campuran volume yang sama dari anilin dan xilena (1 - 2 ml); solusi dikeringkan sampai awan pewarna berhenti bergerak menjauh dari irisan.
9. Dilakukan setelah 3 perubahan xilena.
10. Terlampir dalam balsam atau resin yang dilarutkan dalam xilena.

Hasil: Bakteri gram positif berwarna biru-hitam, violet fibrin, nukleus berwarna merah.

Lihat juga

• Mewarnai mikroorganisme
• Pewarna anilin

Tautan

Di Jerman

• Gram, HC (1884). "Über die isolat Färbung der Schizomyceten di Schnitt und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin 2: 185-89.

Dalam bahasa inggris

Metode penelitian mikrobiologi

Tujuan penelitian mikrobiologi adalah untuk menetapkan peran etiologi mikroorganisme tertentu jika terjadi suatu penyakit atau sindrom klinis. Perlu diingat bahwa agen penyebab proses inflamasi organ sistem reproduksi dapat sebagai UPM - perwakilan komponen transien mikroflora normal vagina dan biotop lainnya, dan patogen absolut - agen penyebab IMS. Hubungan antara IMS dan infeksi oportunistik (yang disebabkan oleh DMP) menentukan perlunya pendekatan terpadu terhadap diagnosis mikrobiologis.

INDIKASI

Metode penelitian mikrobiologi digunakan untuk mengkonfirmasi atau mengecualikan penyakit yang bersifat menular.

METODE

ATURAN UNTUK MENGAMBIL BAHAN KLINIS

Pelepasan dari uretra diambil dengan loop bakteriologis steril sekali pakai plastik dengan volume 1 μl atau swab dacron tipis pada kawat aluminium. Pembukaan uretra pra-eksternal harus dibersihkan dengan kain kasa atau kapas. Dengan tidak adanya sekresi yang terlihat, dokter dapat melakukan pijatan ringan pada uretra. Tampon / loop dimasukkan ke dalam uretra dengan jarak 1–2 cm dan dikeluarkan dengan menekan sisi samping dan dinding belakang secara perlahan. Untuk studi mikroskopik dan imunofluoresensi, materi ditransfer ke slide kaca dengan memutar tampon atau menggerakkan loop dengan bahan tekanan ringan di atasnya. Untuk budaya dan PCR, bahan ditempatkan dalam tabung dengan media transportasi yang tepat.

Alat kelamin eksternal, malam vagina: noda diambil dengan kapas steril (Dacron) tampon dari daerah yang berubah secara patologis; untuk peradangan kelenjar besar vestibulum, tusukan dilakukan, ketika abses dibuka, kelenjar mengambil nanah dengan kapas steril.

Vagina: setelah penyisipan cermin dan lift, cairan diambil dengan kapas steril dari forniks posterior atau dari bagian membran mukosa yang berubah secara patologis; untuk tujuan kultur, swab ditempatkan dalam tabung steril dan segera dikirim ke laboratorium. Jika persyaratan ini tidak dapat dipenuhi, sampel yang diambil ditempatkan dalam tabung uji dengan media transportasi.

Untuk keperluan mikroskopi, sampel yang diambil dipindahkan ke slide kaca, memutar tampon di semua sisi kaca, mencoba mendistribusikan bahan secara merata, menjaga interposisi alami dari semua komponen biocenosis; apusan dikeringkan di udara, difiksasi dengan larutan etanol 96% (2-3 tetes per smear sampai penguapan lengkap), kaca berlabel dan dalam wadah tertutup yang dikirim ke laboratorium. Selama diagnosis kultur trikomoniasis, cairan yang diambil segera ditempatkan dalam medium nutrisi dan diangkut ke laboratorium.

Mulut rahim: Setelah membuka leher rahim di cermin, bagian vagina rahim hati-hati diobati dengan kapas yang dibasahi dengan larutan natrium klorida 0,9% steril atau air, kemudian kapas standar dimasukkan dengan lembut ke dalam kanalis serviks, ambil cairan, lepaskan tampon tanpa menyentuh dinding vagina, dan letakkan di tabung uji dengan media transportasi untuk budaya. Untuk melakukan mikroskopi dengan metode imunofluoresensi dalam berbagai modifikasi, penelitian virologi atau PCR, bahan diambil dengan sikat khusus, yang dimasukkan ke dalam saluran setelah mengeluarkan sumbatan lendir atau mengambil sampel untuk biakan. Setelah tampon-sikat dimasukkan ke dalam kanalis serviks, itu diputar beberapa kali dengan 1-2 cm untuk mendapatkan goresan sel, tetapi menghindari scarification dan elemen darah pada tampon. Materi yang diambil ditempatkan dalam tabung reaksi dengan media transportasi yang tepat. Untuk studi mikroskopik dan imunofluoresensi, sampel yang diambil segera ditransfer dari swab ke slide kaca.

Rahim: bahan dari rahim untuk penelitian hanya dapat diperoleh dengan menggunakan perangkat khusus dengan lapisan luar pada aspirator syringe. Mengamati aturan asepsis, melewati saluran servikal dan di uterus membuka membran luar syringe, kemudian aspirasi isi. Kemudian tutuplah selubung luar dan keluarkan probe dari rahim.

Pelengkap uterus: bahan dari sumber infeksi dapat diperoleh hanya dengan intervensi bedah (nanah, eksudat, bahan biopsi) atau selama tusukan diagnostik dari formasi mirip tumor di pelvis melalui kubah vagina (pertimbangkan kemungkinan kontaminasi sampel dengan mikroflora vagina). Dalam beberapa kasus, jika situs infeksi di pelengkap rahim berkomunikasi dengan rongga uterus, studi berulang dari saluran serviks mungkin berguna ketika hasil penelitian adalah dari jenis yang sama. Urine: setelah pembilasan menyeluruh pada organ genital eksternal, bagian tengah dari urine bebas yang dilepas pagi dalam jumlah 5–10 ml dikumpulkan dalam wadah steril. Menimbang bahwa mikroorganisme yang terkandung dalam urin mulai berkembang biak pada suhu kamar, sampel harus dikirim ke laboratorium dalam 1-2 jam untuk menghindari hasil yang salah ketika mengukur derajat bakteriuria. Jika tidak mungkin untuk memenuhi persyaratan ini, adalah mungkin untuk menyimpan sampel urin pada suhu 4 ° C dalam lemari es selama tidak lebih dari 12 jam

Darah: kultur darah (deteksi bakteremia) diperlukan jika Anda mencurigai perkembangan sindrom peradangan sistemik. Hipertermia persisten, menggigil, hipotermia, leukositosis, tanda-tanda disfungsi multiorgan berfungsi sebagai indikasi kategoris untuk pemeriksaan mikrobiologi darah. Sampel darah diambil sedini mungkin, dari awal demam 2-3 kali dengan selang waktu 30-60 menit dari vena perifer ekstremitas atas (mengambil darah pada ketinggian demam tidak meningkatkan sensitivitas metode, jumlah optimal darah yang diambil menjadi lebih penting untuk mendeteksi etiologi penyakit). Penggunaan optimal botol komersial standar dengan media nutrisi yang disiapkan untuk penanaman mikroorganisme aerobik dan anaerob yang ketat. Perhatian khusus pada ketaatan aturan asepsis: kulit di lokasi venipuncture diobati dengan larutan 1-2% yodium atau povidoniodine dengan gerakan dari pusat ke pinggiran setidaknya selama 1 menit. Setelah disinfeksi, palpasi situs venipuncture tidak dapat diterima. Segera sebelum tusukan vena, kulit diobati dengan larutan etanol 70%. Manipulasi dilakukan dengan sarung tangan steril. Tutup plastik dikeluarkan dari botol, sumbat karet dilap dengan larutan etanol 70%. Setelah mengambil darah dari pembuluh darah, mereka mengganti jarum dan, menusuk sumbat karet, membawa darah ke dalam botol (sekitar 10 ml darah berada di masing-masing dua vial). Pada anak-anak di bawah 1 tahun, ambil 0,5-1,0 ml darah dalam satu botol. Pada anak-anak dari 1 tahun hingga 6 tahun, total volume darah yang diambil adalah 1 ml untuk setiap tahun kehidupan, dan volume ini didistribusikan antara dua botol. Pada anak-anak dan orang dewasa dengan berat 30 hingga 80 kg, 10–20 ml darah didistribusikan di antara dua vial.

Mengambil satu sampel dari vena perifer dan yang lain dari kateter diperbolehkan hanya dalam kasus luar biasa: jika perlu, mengidentifikasi bakteremia terkait kateter atau dalam kasus kesulitan obyektif yang terkait dengan venipuncture.

STUDI MICROSKOPIK SAMPEL KLINIS

Tahap penting penelitian mikrobiologi dalam diagnosis IMS dan infeksi oportunistik. Memungkinkan Anda untuk memberikan penilaian awal komposisi kualitatif dan kuantitatif mikroflora dalam fokus patologis, menilai kualitas bahan yang diambil (sesuai dengan fokus peradangan, seperti adanya epitelium vagina di smear diambil dari kanal serviks, menunjukkan pelanggaran aturan seleksi bioproof), dan juga mengidentifikasi mikroorganisme yang tidak tumbuh. pada media nutrisi biasa (gonococci, trichomonads, bakteri anaerobik ketat).

Sensitivitas metode mikroskop cahaya adalah pada tingkat deteksi mikroorganisme dalam jumlah 4-5 lg CFU / ml dan banyak lagi. Oleh karena itu, dalam beberapa kasus, mikroorganisme yang secara etiologi signifikan dapat dideteksi dengan mikroskopi. Ini terutama mengacu pada bakteri anaerobik yang ketat, biasanya dengan kemampuan patogenik yang rendah, peran etiologi mereka dimanifestasikan pada tingkat kuantitatif yang tinggi setelah akumulasi di sumber infeksi. Dengan mempertimbangkan orisinalitas morfologi dari banyak jenis anaerob yang ketat (predotela bakterial, fuzobakterii, mobilunkus, veylonella, leptotrihii), serta mikroaerophilic gardnerella, pendeteksian mereka dalam noda bernoda gram pada vagina luapan berfungsi sebagai bukti peran etiologi mereka. Yang terpenting adalah mikroskopi apusan vagina dalam diagnosis vaginosis bakteri dan infeksi vagina lainnya.

Namun, sebagian besar DIM anaerobik opsional tidak memiliki orisinalitas morfologi, dan tingkat patogenisitas dan sensitivitas terhadap antibiotik, sebaliknya, sangat beragam. Oleh karena itu, untuk kelompok ini penelitian budaya UPM menjadi perlu. Selain diagnosis vaginosis bakterial, metode mikroskopis memiliki keuntungan atas budaya dalam diagnosis relatif jarang di negara usia reproduksi mikroekologi vagina: cytolytic vaginosis, bentuk menengah dari microcenosis, atrofi epitel vagina (yang terakhir adalah karakteristik dari usia menopause).

Diagnosis kandidiasis vulvovaginal dapat paling sering dilakukan dengan mikroskopi BTA pada vagina yang dapat dilepas untuk mendeteksi noda bernoda atau asli dari unsur-unsur jamur: tunas sel ragi, fragmen pseudomiselium dengan blastospora. Deteksi unsur jamur dalam usapan menunjukkan sejumlah besar dari mereka (lebih dari 4-5 lg CFU / ml) dan paling sering disertai dengan reaksi leukosit diucapkan dalam apusan vagina dan manifestasi klinis dari proses inflamasi di vagina, yang cukup untuk mengkonfirmasi diagnosis klinis kandidiasis vagina.

Dalam diagnosis laboratorium gonore, pertama-tama, mikroskopi apusan yang diambil dari uretra dan kanalis serviks dilakukan (jika tidak ada indikasi untuk memeriksa lokus lain: faring, konjungtiva, rektum). Anda harus mencoba melakukan secara paralel untuk 2 sapuan dari masing-masing lokus untuk pewarnaan biru dan Gram. Gonore akut ditandai oleh tidak adanya atau jumlah yang jarang dari perwakilan mikroflora normal (lactobacilli), sejumlah besar leukosit neutrofilik dan adanya diplokokus gram negatif yang terletak di dalam leukosit (dengan fenomena fagositosis tidak lengkap) dan leukosit di luar. Gonorrhea kronik ditandai oleh adanya beragam mikroflora bersama dengan diplococci gram negatif di dalam dan di luar leukosit dan sejumlah besar neutrofil. Paling sering, diagnosis gonore dapat dilakukan atas dasar mikroskop Gram smear. Namun, pada wanita hamil, remaja dan anak-anak, studi budaya dengan identifikasi spesies Neisseria gonorrhoeae diperlukan untuk membedakan dari Neisseries non-patogenik, yang diakui sebagai komponen dari mikroflora vagina normal pada anak perempuan, dan dalam kasus mengambil bahan dari orofaring harus diingat sejumlah besar neusergies non-patogenik pada apusan ini. umur

Metode mikroskopis tetap saat ini yang utama dalam diagnosis trikomoniasis urogenital. Melakukan penelitian tentang obat asli dan / atau noda berwarna. Mikroskopis dari obat asli, penting untuk diingat bahwa bahan baru (uretra yang dapat dilepas, vagina) harus diselidiki - dalam persiapan mereka mengungkapkan hidup, Trichomonas mobile. Untuk melakukan hal ini, siapkan obat sesuai dengan metode "hancur" drop (diambil sebagai debit dengan penambahan larutan natrium klorida 0,9% hangat dekat dengan suhu tubuh ditutupi dengan kaca penutup) atau "menggantung" drop (suspensi dari ekskresi yang diambil ditempatkan ke dalam sumur slide kaca) dan mikroskopis pada perbesaran 400 kali ketika kondensor diturunkan. Persiapan untuk mewarnai dengan metilen biru, Gram atau Romanovsky - Giemsa disiapkan dari bahan ini. Diagnosis ditegakkan atas dasar identifikasi bentuk-bentuk khas Trichomonas vaginalis dalam apusan.

Ketika mengevaluasi hasil pemeriksaan mikroskop vagina, seseorang harus memperhatikan poin-poin berikut:

• kondisi epitelium vagina: didominasi oleh sel permukaan, lapisan menengah atau parabasal; kehadiran apa yang disebut "kunci" sel - sel epitel permukaan padat dilapisi dengan batang gramvariabel kecil yang melekat padanya, menyembunyikan sel berbatasan (Gambar 6-1), atau "kunci palsu" sel - peningkatan adhesi pada sel epitel batang gram positif, paling sering laktobasilus ( Gambar 6-2);
• reaksi leukosit: kehadirannya, keparahan, manifestasi fagositosis, penyelesaiannya;
• komposisi mikroflora: penilaian kuantitatif dan kualitatif oleh morphotypes dan sifat tinctorial.

Fig. 6-1. Sel Key Salah (Gram Smear Microscopy).

Fig. 6-2. Normotsenosis (mikroskopi Gram smear). Evaluasi kontaminasi mikroba total dilakukan pada sistem 4-titik (kriteria Nugent, yang dimodifikasi oleh kami) - dengan jumlah sel mikroba yang terdeteksi di bidang pandang yang sama selama mikroskopi dengan pencelupan:

+ - hingga 10 sel mikroba di bidang pandang - jumlah minimum; ++ - dari 11 hingga 100 sel mikroba di bidang pandang - angka sedang; +++ - dari 100 hingga 1000 sel mikroba di bidang pandang - sejumlah besar;

++++ - Lebih dari 1000 sel mikroba di bidang pandang - jumlah besar.

Penilaian kualitatif dari mikroflora vagina mencakup diferensiasi semua morfotipe menurut sifat tinctorial dan ciri morfologi mereka. Ada morphotypes lactobacilli, fusobacteria, bakteroid, mobilunkusov, leptotrichia, weillonellus, gardnerellas, serta cocci gram positif, coliform stick, jamur ragi. Trichomonas dan parasit lainnya dapat ditemukan di apusan.

Ketika sifilis dicurigai, mikroskopi medan gelap dari erosi dan ulkus yang dapat dilepas dan metode imunofluoresensi langsung dengan penggunaan diagnostik diagnostik AT ke T. pallidum belum kehilangan nilai diagnostiknya. Metode ini digunakan dalam kasus dengan manifestasi klinis pada kulit dan selaput lendir yang dicurigai sifilis. Selain itu, persiapan untuk mikroskopi dapat dipersiapkan dari belang-belang kelenjar getah bening regional, cairan serebrospinal, cairan amniotik. Permukaan erosif dan ulserasi hati-hati (tidak mengalami perdarahan) dibersihkan dengan tampon kasa yang dibasahi dengan 0,9% larutan natrium klorida, kemudian dengan lembut meremas dan membuka dasar pangkal ulkus / erosi dengan dua jari, menstimulasi sekresi eksudat serosa yang diambil dengan loop bakteriologis atau dengan lembut menerapkan pada slide kaca permukaan erosif. Pembuangan serosa yang dihasilkan dicampur dengan jumlah yang sama dari 0,9% larutan natrium klorida, ditutupi dengan kaca penutup dan persiapan asli adalah mikroskop untuk mendeteksi patogen untuk sejumlah tanda morfologi karakteristik dan jenis gerakan. Pengalaman tertentu diperlukan untuk membedakan, dalam mikroskopi, treponema pucat dari treponemcommensals saluran urogenital.

Lebih obyektif mungkin diagnosis persiapan mikroskopi menggunakan imunofluoresensi langsung. Dalam kasus ini, cairan yang diambil dari slide kaca dari cairan jaringan apa pun, permukaan area patologis (termasuk bahan otopsi) dikeringkan di udara, difiksasi dengan etanol atau metanol. Setelah itu, globulin anti-treponemal khusus untuk T. pallidum diterapkan untuk persiapan. Pemeriksaan mikroskopis agen terdeteksi oleh fluoresensi terang hijau terang.

Metode imunoluminesen - diagnosis laboratorium utama dan dalam HG, sementara dalam persiapan bahan patologis, virus Ag terdeteksi. Biasanya, metode immunofluorescence langsung digunakan, yang memungkinkan untuk menentukan kedua jenis HSV dan serotipe HSV1 dan HSV2 secara terpisah. Sensitivitas dan spesifisitas metode tergantung pada kualitas kit diagnostik yang digunakan. Bahan untuk penelitian biasanya cairan dari vesikula terbuka, pembuangan permukaan erosif kulit dan selaput lendir atau goresan dari dinding saluran serviks (dengan bentuk laten infeksi). Materi diambil dengan loop bakteriologis atau swab khusus dan dipindahkan ke slide kaca.

Pada klamidia urogenital, deteksi Ar chlamydia menggunakan mikroskopi imunofluoresensi adalah salah satu metode diagnostik laboratorium terkemuka. Biasanya, immunofluorescence langsung digunakan, selama antibodi monoklonal diterapkan pada berbagai Chlamydia Ag - lipopolisakarida (kelompok), spesies protein utama dari membran luar Chlamydia, dan antibodi terhadap rekombinan Ag chlamydia. Kualitas diagnostik menentukan tingkat sensitivitas metode. Kualitas mengambil bahan sangat penting dalam mengevaluasi hasil imunofluoresensi langsung: dalam apusan pada gelas sampel yang diambil dari kanal servikal, sel-sel epitel silinder harus ada dan tidak boleh ada sel epitel skuamosa, eritrosit dan leukosit. Hasilnya dianggap positif jika dalam apusan mikroskop yang dapat dilepas dengan mikroskop fluoresen pada latar belakang sel-sel epitel oranye-coklat, seseorang menemukan setidaknya 5 tubuh dasar dengan peningkatan 100 kali. Karena kemungkinan hasil positif palsu, metode ini tidak disarankan untuk studi bahan yang berasal dari nasofaring dan rektum.

PENELITIAN BUDAYA

Metode penanaman dan isolasi kultur murni patogen penyakit berfungsi sebagai "standar emas" diagnostik mikrobiologi. Seiring dengan mikroskopi, penelitian budaya adalah metode utama untuk mendiagnosis gonore, trikomoniasis, klamidia. Metode penelitian molekuler dan biologi belum cukup spesifik untuk mendeteksi patogen STI ini untuk menggantikan metode klasik, tetapi, tidak diragukan lagi, masa depan adalah milik mereka. Situasi yang berbeda telah muncul dengan infeksi oportunistik pada saluran genital, jumlah yang di era antibiotik dan urbanisasi kehidupan masyarakat terus meningkat, struktur etiologi mereka dan kepekaan terhadap antibiotik berubah secara dinamis. Resistensi antibiotik yang sering dari mikroorganisme ini menyebabkan pengobatan gagal, oleh karena itu, pilihan terapi etiotropik rasional yang rasional dalam kondisi modern diakui sebagai masalah klinis konstan.

Telah diketahui bahwa agen penyebab proses peradangan dari organ genital dapat berupa berbagai UPM, biasanya bagian dari komponen transien dari mikroflora pribumi (normal) mikroflora vagina dan biotop yang berdekatan. Sifat patogenik mereka dimanifestasikan hanya dalam kondisi tertentu, gangguan homeostasis imun dari makroorganisme dan ketahanan kolonisasi lokal. Dalam kondisi ini, diagnostik mikrobiologi harus mempertimbangkan peran etiologi yang mungkin dari berbagai patogen, dan bukan hanya patogen spesifik, seperti dalam diagnosis penyakit infeksi klasik yang disebabkan oleh patogen absolut. Tugas dari penelitian ini tidak hanya mengidentifikasi mikroorganisme yang ditemukan dalam bahan patologis, tetapi juga alasan untuk peran etiologi mereka dalam proses inflamasi pada pasien ini. Oleh karena itu, ketika menabur bahan klinis, terutama dari lokus, dan biasanya memiliki mikroflora, sangat penting untuk menggunakan media nutrisi yang paling serbaguna yang cocok untuk membudidayakan berbagai mikroorganisme. Dalam hal ini, perlu memperhitungkan rasio kuantitatif pertumbuhan berbagai jenis mikroorganisme dalam pembibitan primer, karena agen penyebab yang benar paling sering merupakan bagian dari peran yang berlaku di antara rekan-rekan. Namun, ada spesies yang menunjukkan sifat patogen dalam jumlah kecil (streptokokus kelompok A dan B, proteus, Klebsiella, Staphylococcus aureus, Listeria, dll.).

Diagnosis mikrobiologis infeksi oportunistik vagina didasarkan pada penilaian terpadu dari hasil studi mikroskopis dan budaya. Pada saat yang sama, komponen mikroflora anaerobik yang ketat dievaluasi dengan mikroskop gram - sejumlah besar morfotipe anaerobik yang terdeteksi oleh mikroskop cahaya (jumlah mereka dalam vagina yang dapat dilepas melebihi 6 lg CFU / ml) menunjukkan peran etiologi mereka. Pada saat yang sama, penentuan sensitivitas anaerob terhadap antibiotik saat ini tidak memiliki kegunaan klinis, karena sebagian besar dari mereka sangat sensitif terhadap antibiotik dengan aktivitas anti-anaerobik (klindamisin, metronidazol).

Sebaliknya, berkaitan dengan mikroorganisme aerobik dan aerobik fakultatif, nilai diagnostik pemeriksaan mikroskopis keputihan secara signifikan berkurang. Hal ini disebabkan, pertama, pada fakta bahwa kemampuan patogenik bakteri ini dapat bermanifestasi pada jumlah yang relatif kecil (3-5 lg CFU / ml), yang tidak terdeteksi oleh mikroskop. Kedua, bahkan jika morphotypes bakteri anaerob fakultatif ditemukan dalam gram, mereka secara morfologis sama dalam banyak spesies dan genera bakteri (ini adalah coliform sticks atau cocci gram positif). Pada saat yang sama, sifat patogen dan kepekaannya terhadap antibiotik bisa sangat beragam. Oleh karena itu, untuk mengkarakterisasi bagian anaerobik fakultatif dari microcenosis, serta microaerophiles (terutama lactobacilli), yang oleh morfologi mungkin mirip dengan banyak jenis bakteri anaerob obligat (clostridia, eubacteria, propionibacteria, dll), studi budaya diperlukan - penyemaian cairan vagina. Untuk tujuan ini, agar darah 5% digunakan (media paling universal untuk sebagian besar UPM), Saburo agar (untuk isolasi jamur), media MPC (untuk pembudidayaan lactobacilli).

Hasil studi budaya memberikan kesempatan untuk menilai komposisi spesies dan rasio kuantitatif berbagai spesies dalam asosiasi mikroorganisme, termasuk jamur, dan juga lactobacilli, dan dengan demikian mengkonfirmasi bahwa laktomorphotypes yang terdeteksi oleh mikroskop gramatikal milik genus lactobacilli. Pemilihan material patologis dan identifikasi berbagai spesies famili Enterobacteriaceae, staphylococci, streptococci, bakteri yang tidak berfermentasi, Neisseria, Corynebacteria, jamur dan mikroorganisme lainnya, setelah mengukur pertumbuhan mereka, menentukan derajat signifikansi etiologi mereka dalam perkembangan vaginitis pada pasien tertentu.

Selain itu, dalam kasus di mana diagnosis vaginosis bakterial dibuat oleh mikroskop dari apusan gram negatif, hasil pembenihan dapat mengungkapkan peninggian UPM tinggi (jamur, enterococci, coliform dan bakteri lain) yang dapat menyebabkan komplikasi setelah terapi etiotropik dengan obat dengan aktivitas anti-anaerobik. Terutama harus diingat mikroorganisme, yang bahkan dalam konsentrasi rendah adalah faktor peningkatan risiko untuk janin (Listeria, Streptococcus Grup A dan B).

Metode untuk identifikasi asam nukleat

Metode untuk mendeteksi patogen DNA dan RNA saat ini digunakan terutama untuk diagnosis infeksi virus. Metode diagnosa gen didasarkan pada identifikasi urutan nukleotida secara langsung dalam bahan patologis dengan bantuan probe molekuler - asam nukleat yang diturunkan secara artifisial yang melengkapi asam nukleat virus dan diberi label dengan biotin atau label radioaktif.

Fitur dari metode PCR adalah penyalinan banyak (amplifikasi, replikasi) menggunakan enzim DNA polimerase dari fragmen DNA spesifik yang terdiri dari beberapa puluhan atau ratusan pasang nukleotida, yang unik, yaitu spesifik untuk jenis patogen virus. Mekanisme replikasi adalah sedemikian rupa sehingga penyelesaian fragmen dapat dimulai hanya di blok awal tertentu, untuk penciptaan yang di wilayah tertentu dari DNA, primer - oligonukleotida yang disintesis khusus - digunakan. Primer adalah pelengkap urutan dalam batas-batas fragmen tertentu, dan sintesis DNA hanya berlaku dalam batas-batas ini.

Proses PCR terdiri dari sejumlah besar siklus sintesis (amplifikasi) dari fragmen DNA spesifik, akumulasi dari sejumlah besar salinan, yang kemudian dapat dideteksi dengan metode deteksi konvensional (analisis imunofluoresensi, elektroforesis).

● kesederhanaan eksekusi; ● kemungkinan otomatisasi lengkap; ● kecepatan untuk mendapatkan hasil; ● sedikit bahan patologis yang diperlukan untuk penelitian; ● kemungkinan mendiagnosis infeksi akut, kronis, laten;

● identifikasi patogen yang tidak dapat diolah dan persisten.

Sensitivitas PCR adalah yang paling sempurna sebagai metode diagnostik (beberapa kali lipat lebih tinggi daripada tes lain). Kekhususan metode ini juga tinggi, tetapi sejauh ini sebagian besar sistem uji tidak cukup andal untuk memaksa metode klasik untuk mendiagnosis bahkan patogen absolut.

Sedangkan untuk infeksi oportunistik, signifikansi metode diagnostik genetika molekuler belum dapat dikenali sebagai bermakna, karena faktor yang menentukan dalam perkembangan proses inflamasi tersebut adalah faktor kuantitatif, dan bukan keberadaan mikroorganisme itu sendiri di lokus yang diteliti.

Saat ini, metode PCR secara luas digunakan dalam diagnosis IMS viral, parasit dan bakteri, sering sebagai skrining primer, serta kontrol penyembuhan dalam kombinasi dengan metode lain dari diagnosis laboratorium. Menggunakan teknologi terbaru, seperti PCR dan NASBA waktu nyata, adalah mungkin untuk menentukan jumlah pasti virus pada pasien HIV.

METODE DIAGNOSA SEROLOGI

Metode yang mengidentifikasi patogen AT dan Ar spesifik. Peran mereka penting terutama dalam kasus di mana isolasi patogen menyajikan kesulitan yang signifikan. Ketika AT spesifik terdeteksi, perlu untuk menetapkan peningkatan titer mereka, sehubungan dengan sera yang dipasangkan yang dipelajari dengan selang waktu 2–3 minggu. Definisi kelas imunoglobulin jelas menggambarkan tahapan proses infeksi dan dalam beberapa kasus dapat berfungsi sebagai tanda prognostik tentu saja.

Yang sangat penting adalah metode untuk mendeteksi patogen Ag. Mereka dapat dideteksi pada tahap paling awal dari proses infeksi, yang memungkinkan diagnosis secara tegas, dan penentuan kuantitatif Ar dalam dinamika penyakit berfungsi sebagai kriteria untuk efektivitas pengobatan.

Metode serologi telah menjadi sangat penting dalam diagnosis sifilis dan infeksi HIV. Dalam diagnosis infeksi HIV, tes immunosorbent yang terkait dengan enzim biasanya digunakan, yang memungkinkan untuk mendapatkan hasil positif dari penelitian sedini 1–1,5 bulan setelah infeksi. Hasil skrining positif menggunakan enzim immunoassay memerlukan konfirmasi dengan metode imunoblot, yang memungkinkan verifikasi antibodi terhadap berbagai protein virus.

Dalam diagnosis sifilis, berbagai metode serologis saat ini digunakan, yang memungkinkan deteksi antibodi terhadap berbagai determinan AH T. pallidum dalam tubuh. Tergantung pada Ag yang digunakan, reaksi serologis dibagi menjadi dua kelompok: treponemal dan non-treponemal. Yang pertama digunakan untuk skrining. Secara teknis mereka sederhana, tidak memerlukan banyak waktu, versi kuantitatif dari reaksi dengan penentuan AT titer adalah mungkin, yang memungkinkan mereka untuk digunakan untuk menilai efektivitas perawatan. Namun, tes ini tidak mendeteksi AT pada 2-4 minggu pertama sifilis primer, dan reaksi negatif dan negatif palsu yang salah adalah mungkin.

Tes Treponemal memiliki spesifisitas tinggi dan memungkinkan untuk mengkonfirmasi hasil tes non-treponemal. Tapi tes treponemal tidak dapat diandalkan dalam studi cairan serebrospinal (kecuali untuk reaksi hemaglutinasi langsung), tes ini juga tidak digunakan sebagai kontrol untuk efektivitas pengobatan dan kemungkinan reaksi positif palsu tidak dikecualikan.

Dengan infeksi bakteri oportunistik, agen penyebab yang memiliki banyak argumen umum dengan argular Ag host dan yang berfungsi sebagai stimulator lemah untuk produksi antibodi spesifik, metode diagnostik serologis praktis tidak digunakan.

INTERPRETASI HASIL PENELITIAN MIKROBIOLOGIS

EVALUASI HASIL PENELITIAN MIKROBIOLOGIS DARI ORGAN GENERAL PRIBADI YANG DIBERIKAN

Ketika mengevaluasi hasil penelitian mikrobiologi dari organ kelamin wanita yang terpisah, perlu untuk mempertimbangkan totalitas tanda-tanda dalam setiap kasus spesifik: data mikroskopi dari apusan primer dari bahan yang diteliti, hasil dari penyemaian langsung pada media nutrisi padat (penilaian kuantitatif dari pertumbuhan berbagai jenis), serta gejala klinis penyakit dan anamnesis pasien. Jadi, dalam studi materi dari rongga tertutup (belang-belang dari formasi mirip tumor di panggul kecil, cairan ketuban), serta organ yang biasanya steril (isi uterus, skrap endometrium, potongan organ dan jaringan dikeluarkan selama operasi), pertumbuhan mikroorganisme, terutama dalam monokultur, bukti peran etiologi mereka. Dalam studi bahan dari lokus, dan biasanya memiliki berbagai mikroflora, sangat penting melekat pada penilaian komposisi spesies, kuantifikasi pertumbuhan berbagai spesies yang ditanam selama penyemaian primer, keseragaman hasil dengan penelitian berulang, serta data klinis. Berdasarkan penilaian terpadu dari hasil mikroskopi dan kultur keluarnya vagina, kriteria mikrobiologi berikut untuk menilai keadaan mikrokenosis vagina untuk bentuk nosokologis individu pada wanita usia reproduksi dapat diusulkan.

NORMOCENOSIS

• Mikroskopi dari apusan pulasan Gram (Gambar 6-3): ♦ Epitel vagina diwakili oleh sel-sel pada lapisan permukaan, sel-sel pada lapisan perantara kurang umum (rasio dapat bervariasi tergantung pada fase siklus menstruasi, wanita hamil memiliki banyak sel perantara), tidak ada sel "kunci", kadang-kadang "false-key" sel yang ditemui; ♦ reaksi leukosit tidak ada atau lemah diekspresikan - leukosit terisolasi di bidang pandang; ♦ jumlah mikroorganisme adalah moderat atau besar; ♦ morphotype dominan adalah lactobacilli, lainnya rotypes tidak ada atau jumlah mereka dihitung

sel mikroba tunggal dalam bidang pandang langka.